乳酸脫氫酶（LDH）測試盒 常量可見分光光度法 說明 技術(shù) 文章
- 當前位置: 首頁 > 生理生化試劑盒 > 常量分光光度計法 > 輔酶I系列 > 乳酸脫氫酶（Lactate Dehydrogenase，LDH）試劑盒
乳酸脫氫酶（Lactate Dehydrogenase，LDH）試劑盒
商品貨號：QS1001
英文名稱：Lacate Dehydrogenase（LDH）Assay Kit
別名：乳酸脫氫酶試劑盒 LDH Kit 乳酸脫氫酶（LDH）試劑盒 乳酸脫氫酶（LDH）測試盒
檢測方法：常量法
| 商品貨號： | 商品品牌： | 規(guī)格 | 基本售價 | 選擇規(guī)格 |
|---|---|---|---|---|
| QS1001-50管/24樣 | 50管/24樣 | ￥170.00元 |
- 產(chǎn)品詳細介紹
- 產(chǎn)品說明書
測定意義：
LDH（EC 1.1.1.27）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，是糖酵解途徑的末端酶，催化丙酮酸與乳酸之間的可逆反應，伴隨著NAD+/NADH之間互變。
測定原理：
LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸進一步與2, 4 - *肼作用生成丙酮酸*腙，在堿性溶液中顯棕紅色，顏色深淺與丙酮酸濃度成正比。
貨號：QS1001 規(guī)格：50管/24樣
乳酸脫氫酶（Lactate Dehydrogenase，LDH）試劑盒說明書
分光光度法
正式測定前務(wù)必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：
LDH（EC 1.1.1.27）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，是糖酵解途徑的末端酶，催化丙酮酸與乳酸之間的可逆反應，伴隨著NAD+/NADH之間互變。
測定原理：
LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸進一步與2, 4 - *肼作用生成丙酮酸*腙，在堿性溶液中顯棕紅色，顏色深淺與丙酮酸濃度成正比。
自備實驗用品及儀器：
可見分光光度計、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
提取液：30mL×1瓶， 4℃保存；
試劑一：液體15 mL×1瓶， 4℃保存；
試劑二：粉劑×1支，-20℃保存，用時加入1.3 mL雙蒸水充分溶解備用，配好后-20 ℃保存，可保存兩周，禁止反復凍融；
試劑三：液體15 mL×1瓶，4℃保存；
試劑四：液體50 mL×1瓶，4℃保存；
操作步驟：
一、樣品測定的準備：
- 細菌或培養(yǎng)細胞：收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清，按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500-1000:1 的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次），8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
- 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積（mL）為1:5-10 的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
- 血清（漿）樣品：直接檢測。
二、測定操作：
- 分光光度計預熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至450nm，蒸餾水調(diào)零。
- 樣本測定（在EP管中加入下列試劑）
試劑名稱(μL) | 測定管 | 對照管 |
樣本 | 50 | 50 |
試劑一 | 250 | 250 |
試劑二 | 50 |
|
蒸餾水 |
| 50 |
充分混勻，37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴15min
試劑三 | 250 | 250 |
充分混勻，37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴15min
試劑四 | 750 | 750 |
充分混勻，室溫靜置3min，450 nm下測定吸光度，計算ΔA=A測定管-A對照管。每個測定管需要設(shè)一個對照管。
LDH活力單位計算：
- 標準條件下測定的回歸曲線， y = 0.725x (x為標準品濃度，μmol/mL；y為對吸光度)。
- 血清（漿）LDH活力的計算
單位的定義：每mL血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生1nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。
LDH（U/mL）=ΔA÷0.725÷T×103=92×ΔA
- 細胞、細菌和組織中LDH活力的計算
- 按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1 nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。
LDH（U/mg prot）=[ΔA÷0.725×V 1] ÷ (V1×Cpr) ÷T×103 =92×ΔA÷Cpr
需要另外測定，建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量測定試劑盒。
- 按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每分鐘催化產(chǎn)生1nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。
LDH（U/g鮮重）=[ΔA÷0.725×V 1] ÷ (W ×V1÷V2) ÷T×103 =92×ΔA÷W
- 按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘催化產(chǎn)生1nmol丙酮酸定義為一個酶活力單位。
LDH（U/104 cell）= [ΔA÷0.725×V 1]÷(500 ×V1÷V2) ÷T×103 =0.184×ΔA÷W
V1：加入反應體系中樣本的體積，0.05 mL；V2：加入提取液的體積，1 mL； T：反應時間，15 min；Cpr：蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣品質(zhì)量，g; 500：細胞或細菌總數(shù)，500萬。
| 輔酶Ⅰ系列 | ||||
| QS1000 | 輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒 | 可見分光光度法 | 50管/24樣 | 500 |
| MS1000 | 輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒 | 微量法 | 100管/48樣 | 920 |
| QS1001 | 乳酸脫氫酶（LDH）測試盒 | 可見分光光度法 | 50管/24樣 | 170 |
| MS1001 | 乳酸脫氫酶（LDH）測試盒 | 微量法 | 100管/48樣 | 330 |
| QS1002 | NAD-蘋果酸脫氫酶（NAD-MDH）測試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 280 |
| MS1002 | NAD-蘋果酸脫氫酶（NAD-MDH）測試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 550 |
| QS1003 | NADP-蘋果酸脫氫酶（NADP-MDH）測試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 320 |
| MS1003 | NADP-蘋果酸脫氫酶（NADP-MDH）測試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 600 |
| QS1004 | NADH氧化酶（NOX）測試盒 | 可見分光光度法 | 50管/48樣 | 450 |
| MS1004 | NADH氧化酶（NOX）測試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 850 |
| QS1005-50 | 檸檬酸合酶(CS）測試盒 | 可見分光光度法 | 50管/48樣 | 3200 |
| QS1005-25 | 檸檬酸合酶(CS）測試盒 | 可見分光光度法 | 25管/24樣 | 2000 |
| MS1005 | 檸檬酸合酶(CS）測試盒 | 微量法 | 100管/48樣 | 3500 |
| QS1006 | 丙酮酸脫羧酶（PDC）測試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 720 |
| MS1006 | 丙酮酸脫羧酶（PDC）測試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 1400 |
| QS1007 | 醇脫氫酶（ADH）測試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 280 |
| MS1007 | 醇脫氫酶（ADH）測試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 550 |
| QS1008 | 單脫氫抗壞血酸還原酶（MDHAR）測試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 800 |
| MS1008 | 單脫氫抗壞血酸還原酶（MDHAR）測試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 1550 |
| QS1009 | 乙醛脫氫酶（ALDH）測試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 420 |
| MS1009 | 乙醛脫氫酶（ALDH）測試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 800 |
| QS1010 | NAD激酶（NADK）測試盒 | 可見分光光度法 | 50管/48樣 | 600 |
| MS1010 | NAD激酶（NADK）測試盒 | 微量法 | 100管/48樣 | 1100 |
| QS1011 | 線粒體呼吸鏈復合體Ⅰ/NADH-輔酶Q還原酶測試盒 | 紫外分光光度法 | 25管/24樣 | 1280 |
| MS1011 | 線粒體呼吸鏈復合體Ⅰ/NADH-輔酶Q還原酶測試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 2500 |