了解一下脂肪酸合成酶測(cè)試盒的使用方法吧
更新時(shí)間：2023-05-04 | 點(diǎn)擊率：1784
脂肪酸合成酶測(cè)試盒是一種用于檢測(cè)脂肪酸合成酶活性的試劑盒。它可以快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)樣品中脂肪酸合成酶的活性水平，可用于體外和體內(nèi)活性測(cè)定。
細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)的積累是脂質(zhì)合成與分解失衡的結(jié)果。脂肪酸合成增多，而氧化分解降低，會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)積累。FAS 是脂肪酸合成關(guān)鍵酶，催化乙酰輔酶 A 和丙二酰輔酶 A 而生成長(zhǎng)鏈脂肪酸。FAS 普遍表達(dá)于各種組織細(xì)胞中，在哺乳動(dòng)物肝、腎、腦、肺和乳腺以及脂肪組織中表達(dá)豐富。
以下是使用脂肪酸合成酶測(cè)試盒的步驟：
1.樣品制備：將待測(cè)樣品提取出其中的脂質(zhì)，并將脂質(zhì)轉(zhuǎn)化為三酰甘油(TAG)。這一步通常采用氯仿-甲醇混合物(2：1)進(jìn)行脂質(zhì)提取，然后用異丙醇-氯仿(1：1)將脂質(zhì)轉(zhuǎn)換為T(mén)AG。
2.反應(yīng)液制備：根據(jù)說(shuō)明書(shū)中的配方制備反應(yīng)液。通常需要混合緩沖液、輔酶A、NADPH、蛋白質(zhì)樣品和熒光底物。
3.反應(yīng)開(kāi)始：加入反應(yīng)液后，啟動(dòng)酶促反應(yīng)。這一步通常在37°C下進(jìn)行，持續(xù)時(shí)間為30分鐘至2小時(shí)不等。
4.反應(yīng)停止：添加停止液或?qū)⒎磻?yīng)液放在冰上使反應(yīng)停止。
5.測(cè)量熒光值：使用熒光分光光度計(jì)測(cè)量反應(yīng)液中的熒光值。熒光值與脂肪酸合成酶活性成正比。
需要注意的是，使用脂肪酸合成酶測(cè)試盒時(shí)需要遵循說(shuō)明書(shū)中的操作步驟和安全注意事項(xiàng)。同時(shí)，不同型號(hào)和品牌的測(cè)試盒操作方法可能略有差異，建議在使用前先仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)。