DNA電泳常見問題分析
DNA電泳常見問題分析
常見問題 可能原因 建議解決方案
DNA降解避免核酸酶污染
電泳緩沖液陳舊
電泳緩沖液多次使用后，離子強(qiáng)度降低，pH值升高，緩沖能力減弱，從而影響電泳效果。
建議經(jīng)常更換電泳緩沖液。
電泳條件不合適
電泳時(shí)電壓一般不超過20V/cm，溫度<30℃，大分子量DNA電泳時(shí)溫度應(yīng)<15℃，檢查電泳
緩沖液是否有足夠的緩沖能力。
DNA上樣量過多減少凝膠中DNA的上樣量
DNA含鹽量過高電泳前通過乙醇沉淀除去過多的鹽等雜質(zhì)
DNA條帶模糊
DNA有蛋白污染電泳前用酚/氯仿抽提除去蛋白等雜質(zhì)
DNA變性電泳前勿加熱并用20mM NaCl緩沖液稀釋DNA
對(duì)于λ Hin dⅢ 片段
cos位點(diǎn)復(fù)性
電泳前于65℃加熱DNA5分鐘，然后在冰上冷卻5分鐘。
電泳條件不合適
電泳時(shí)電壓一般不超過20V/cm，溫度<30℃，大分子量DNA電泳時(shí)溫度應(yīng)<15℃，建議經(jīng)常
更換電泳緩沖液。
DNA變性電泳前勿加熱并用20mM NaCl緩沖液稀釋DNA
DNA上樣量不夠增加凝膠中DNA的上樣量
DNA降解避免核酸酶污染
DNA電泳常見問題分析
DNA跑出凝膠縮短電泳時(shí)間、降低電壓、提高凝膠濃度
對(duì)于EB染色的凝膠所
用光源不合適
應(yīng)用短波長(zhǎng)（254nm）的紫外光源
小分子DNA跑出凝膠縮短電泳時(shí)間、降低電壓、提高凝膠濃度
分子大小相近的DNA
帶不易分辨
延長(zhǎng)電泳時(shí)間并核準(zhǔn)正確的凝膠濃度
DNA變性電泳前勿加熱并用20mM NaCl緩沖液稀釋DNA
條帶很弱或
無DNA條帶
DNA分子量太大常規(guī)
凝膠不合適
在脈沖凝膠電泳上分析
上海索萊寶